最近看了很多文献，体积排阻色谱(SEC)多角度激光散射检测器(Multi-anglelaserlightscatteringdetector，MALS或MALLS)组合可以获得高分子化合物(蛋白质和多肽、多糖、多聚核苷酸等)的含量信息。)，不需要一系列分子量标准物质，包括平均数和重均。Z分子均匀分子量和分子量分布指数甚至可以获得分子均匀根旋转半径Rg与形状信息、高聚物支化比等，令人心动。

　　然而，多角度激光散射探测器已经进入中国市场至少15年，在药物质量控制中的应用相对较少。目前，只有欧洲药典中包含的羟乙基淀粉的重均匀含量和分子量分布(Molecularweight(Mw)andmolecularweightdistribution)用于检查项目SEC-MALS来做吧。初步推断，这可能与仪器价格昂贵对昂贵，不可替代，也与在药物研发阶段使用这种探测器相关。

　　最近，我发现实验室在10年前就有了这个探测器，一个18视角的激光散射探测器。然而，除了检查羟乙基淀粉外，只有人们使用这种仪器进行的一项研究成功地发表了一篇关于核糖核酸的文章。我相信这么多年来有人一直在尝试使用这种仪器进行研究，但从文章发表的总数来看，这种设备的测量结果可能并不完全令人满意。在尝试使用这种仪器一段时间后，我积累了一些使用经验和教训。我会在这里和你分享。

　　我们的实验室MALS和示差折光检测器(RID)串联，两器都是美国的Wyatt独立的公司Astra与其他类型的检测器相比，软件控制和后期数据处理独立于液相色谱操作系统。

　　为了得到可靠的实验结论，设备的校准是必不可少的，使用设备是必不可少的MALS涉及的校准有三种:一种是体积校准延迟，另一种是90。°角信号校准(甲苯校准)，三、十八视角归一化校准(常称归一化)。

　　一、体积校准延迟

　　它用于校准每个探测器之间的管道体积，并对齐不同探测器检测到的峰值位置。一般情况下，仪器安装由安装工程师完成，延迟体积校准结果将存储在仪器安装中Astra软件实验方法模板(SaveasTemplate)中间，测试时调用方法模板;如果你想在后期更换，MALS与RID在重新测量之前，需要重新测量管道之间的连接。这里需要注意的是，安装工程师检测延迟体积时的流速是否与您测试的流速相同。如果不同，则需要Astra在软件实验方法中输入您的实际使用流量值，以获得准确的校准。因为每个实验的流量可能需要调整，实验中的流量取决于HPLC系统控制，实验者有时会忽略这个问题。

　　二，90°角度信号校准(甲苯校准)

　　是为了获得90°角度散射光强度值和电压值的校正系数。建议每年或每半年进行一次甲苯校准，可由仪器维护工程师操作或自行完成。每次校准都会形成一个新的校准系数，需要手动输入校准系数Astra模板或实验方法中的软件实验方法。

　　三、十八视角归一化校准

　　是以90°以90为基础，校正除90°其他17个检测器在角外。一般使用Rg低于10nm标准产品校准(30)KDa的右旋糖酐Dextran，或牛血清白蛋白BSA)。

　　在检测样品之前，应检查这三个校准结果，以确保仪器的良好工作状态。特别是对于第三个归一化校准，应使用适当的标准产品确认每个测试。如果测量的标准产品含量结果与标称值之间的误差大于5%，或测量结果的不确定性大于2%，则第一步可以重新平衡系统或色谱柱，重新测量标准产品。如果重新测试结果仍然存在较大误差，第二步需要从18个角度重新校准，并用新的校正系数计算。

　　下表是2012年至今年我们实验室几个实验的归一化校正系数的对比表。从表中可以看出，某些角度的校正值会随着流动相类型和试验日期的变化而发生很大的变化。

　　在做十八视角归一化校正时，要注意定峰(Peaks)激光的半峰高(大概值)，如图所示，而不是我们通常用作样品来测量的整个峰。

　　这里还要说明的是，18视角归一化校准的指数和90°角度信号校准(甲苯校准)的指标相同，可以在测试后输入，然后用新的校正系数重新计算处理样品测量数据。Astra软件带来了这个功能。换句话说，如果在测试序列之前没有进行归一化校准，则可以找到相同流动相的归一化校准系数。这样做的前提是仪器质量稳定，检测器的循环池不受污染。

　　除了设备的校准外，要得到一个可靠的实验结论，第二个重要的注意事项是保持探测器基线的平直。对于光散射探测器，有必要确保流入探测器的流动相中的粒子直径低于一定限度。要做到这一点，除了使用流动相0.22μm除了滤膜过滤外，最好每天准备制备流动相或每天再次过滤流动相。当然，如果在线过滤器可以连接到仪器流中，可以更好地降低基线噪声。此外，一些品牌的凝胶柱填料在实验中可能会有一定程度的损失，这也是基线噪声的来源之一，一般来说ShodexOhpak凝胶柱的柱损失较小，更适合光散射探测器。对于示差折射探测器，主要注意的是保证环境温度的稳定。

　　第三个可能影响实验结论的因素是样品dn/dc值。如果有条件，即样品量足够，建议在试验前测量样品dn/dc值。如果样品数量过少，可以使用文献值参与计算。下表列出了一些物质文献报道dn/dc从表中的数据可以看出不同实验室测量的值dn/dc还是有偏差的。